Презентация на тему: 3.2 Выявление органоидов и включений

Структура клеток микроорганизмов Методы выявления органоидов и включений

Отличия прокариотической клетки от эукариотической

Методы выявления капсулы. Метод окраски по Бурри-Гинсу Смешать каплю взвеси бактерий с каплей туши, сделать мазок, высушить и зафиксировать. На мазок нанести водный раствор фуксина (на 1-2 минуты) промыть водой, высушить и микроскопировать. Бактерии окрашиваются в розовый цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне.

Метод окраски по Цилю-Ни(е)льсену Нанести на мазок карболовый раствор фуксина и подогреть до появления паров в течение 3 - 5 минут, промыть водой нанести 5% раствор H2SO4 на 1-2 минуты промыть водой докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут промыть водой, высушить и микроскопировать. Раствор карболовой кислоты разрыхляет поверхностные структуры бактерий и тем самым повышает их тинкториальные свойства, при этом вегетативные формы окрашиваются в красный цвет.

Метод окраски по Ожешко (и) На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор HCl и подогреть на пламени 2-3 минуты кислоту слить, препарат промыть водой, просушить, зафиксировать затем окрасить по Цилю-Нильсену Раствор карболовой кислоты разрыхляет оболочку спор и тем самым повышает её тинкториальные свойства, при этом споры и вегетативные формы окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой вегетативные формы обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а споры остаются красными.

Метод окраски зерен волютина по Нейссеру На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2 - 3 минуты добавить раствор Люголя на 10 - 30 секунд промыть водой мазок докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 30 - 60 секунд промыть водой, высушить, микроскопировать желтый цвет. Зерна волютина имеют щелочную реакцию, поэтому воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма, имея кислую реакцию, воспринимает везувин и окрашивается в желтый цвет.

Окраска жгутиков по методу Лёффлера Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры. Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и способ нанесения на него суспензии. Высушенный мазок заливают протравой (смесь равных объемов гипертонического раствора хлорида натрия и танина) на 15 мин, промыть дистиллированной водой Препарат окрасить в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, промыть водой, высушить на воздухе. Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину.

L-формы бактерий

L-формы бактерий частично или полностью лишённые клеточной стенки, но сохранившие способность к развитию. Впервые обнаружены в 1894 году Н.Ф. Гамалеем. Буква L — первая буква названия Листеровского института в Лондоне, где впервые были выделены L формы в культуре бактерий Streptobacillus moniliformis. Позже были описаны L-формы у самых разных видов бактерий. Было показано, что L-формы возникают спонтанно или индуцировано - под воздействием агентов, блокирующих синтез клеточной стенки: антибиотиков (пенициллины циклосерин, цефалоспорины, ванкомицин), ферментов (лизоцим, амидаза, эндопептидаза) ультрафиолетовых и рентгеновских лучей, аминокислоты глицина.

L-формы бактерий Различают стабильные и нестабильные L-формы бактерий. Стабильные - полностью лишены ригидной клеточной стенки, что сближает их с протопластами; они крайне редко реверсируют в исходные бактериальные формы. Нестабильные - могут обладать элементами клеточной стенки, в чем они проявляют сходство со сферопластами; в отсутствие фактора, вызвавшего их образование, реверсируют в исходные клетки.

L-трансформация Процесс образования L-форм получил название L-трансформации, или L-индукции. Способностью к L-трансформации обладают практически все виды бактерий, в том числе и патогенные (возбудители бруцеллеза, туберкулеза, листерии и др.). L-формам придается большое значение в развитии хронических рецидивирующих инфекций, носительстве возбудителей, длительной персистенции их в организме. Доказана трансплацентарная инвазивность L-форм бактерий. Инфекционный процесс, вызванный L-формами бактерий, характеризуется атипичностью, длительностью течения, тяжестью заболевания, трудно поддается химиотерапии.

Типичная форма колонии бактерий в L-форме

Полиморфизм клеток Mycoplasma sp.

Морфология колоний Mycoplasma sp.

Спасибо за внимание!