Презентация на тему: 5. Выделение чистых культур. Идентификация

Этапы выделения чистых культур. Идентификация микроорганизмов

РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ НА ЖИДКИХ И ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ. ФАЗЫ РАЗВИТИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПОПУЛЯЦИИ Размножение бактерий определяется временем генерации, т. е. периодом, в течение которого осуществляется деление клетки. Продолжительность генерации зависит от вида бактерий, возраста, популяции, состава питательной среды, температуры и других факторов. В оптимальных условиях время генерации у разных бактерий колеблется довольно в широких пределах: от 20 мин у кишечной палочки до 14 ч у микобактерий туберкулеза, в связи с чем, их колонии образуются через 18—20 ч, либо через 3—5 нед. соответственно.

Кривая роста микроорганизмов

Особенности микробного роста на жидких питательных средах 1. Рост бактерий с равномерным помутнением среды. 2. Придонный рост бактерий, характеризующийся образованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной средой. 3. Пристеночный рост бактерий, выражающийся в образовании рыхлых хлопьев, прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда. 4. Поверхностный рост бактерий, характеризующийся появлением на поверхности жидкой питательной среды пленки.

Этапы выделения чистой культуры микроорганизмов I этап (нативный материал) Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре). Посев на плотные питательные среды (получение колоний). II этап (изолированные колонии) Изучение колоний (культуральные свойства бактерий). Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке (морфологические свойства бактерий). Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры. III этап (чистая культура) Определение культуральных, морфологических, биохимических и других свойств для идентификации культуры бактерий

Выделение чистой культуры

Морфологическое и структурное разнообразие колоний

Форма колоний:

Профиль колоний

Край колоний

Пигменты бактерий Колонии многих бактерий могут быть ярко окрашены, что связано с выделением окрашивающего вещества в среду либо окраской самих бактерий. Среди пигментов преобладают жёлтые, оранжевые и красные каротиноидные пигменты. Пигменты бактерий — вторичные метаболиты, то есть они не являются веществами, обязательно присутствующими у всех бактерий. Например, даже внутри одного вида Serratia mareescens есть пигментообразующие и беспигментные штаммы. Способность к пигментообразованию выражена у видов Sarcina, Micrococcus, Staphylococcus, Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia и др. Этот признак генетически детерминирован, поэтому его используют в качестве дифференцирующего критерия. Пигменты: 1.участвуют в метаболизме бактерий, 2.повышают их устойчивость к химическим веществам, 3. защищают бактерии от действия видимого света и УФ-лучей. Мутанты, лишённые способности к пигментообразованию, быстро погибают на свету. Искусственно окрашенные бактерии (например, метиленовым синим) также проявляют повышенную лабильность к инсоляции. Бактерицидное действие солнечного света проявляется в присутствии кислорода и обусловлено фотоокислением. При этом клеточные пигменты (флавины и цитохромы) действуют как катализаторы. Каротиноиды ингибируют этот процесс. У некоторых бактерий образование пигментов происходит только на свету (например, каротиноидов у туберкулёзной палочки). Многие пигменты проявляют антибиотические свойства. Между пигментацией и образованием вторичных метаболитов существует такая тесная корреляция, что при наличии пигментов можно с большой долей вероятности ожидать образования антибиотиков и других БАВ.

Пигменты микроорганизмов

Биохимические признаки (свойства) бактерий определяются набором ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту микроорганизмов Выявляют посевами на дифференциально-диагностические среды

Ферменты бактерий Энзимы – специфические белки, которые катализируют химические реакции. Классификация ферментов бактерий: По типу катализируемой реакции – оксиредуктазы, лиазы, трасферазы, гидролазы и т.д. По локализации – эндоферменты – катализируют реакции внутри клетки. Экзоферменты – выделяются из бактериальной клетки, катализируют расщепление Генетический контроль образования – конститутивные (в течение всего жизненного цикла, не влияет наличие субстрата), индуцибильные – они образуются в ответ на наличие субстрата По субстрату – протеолитические – расщепляют белки, сахаролитические – расщепляют углеводы, липолитические – расщепляющие жиры.

Протеазы расщепляют белки до аминокислот, мочевины, индола, сероводорода, аммиака. По выделению этих продуктов на средах с белком выявляют наличие протеаз. Среды: С желатином, разжижение среды На свернутой сыворотке по ее разжижению На молоке по его просветлению Казеин – будет разрушаться, белок свертываться. На МПБ по выделению газа индола и сероводорода, которые выявляют с помощью индикаторных бумажек

Протеолитические свойства микроорганизмов

Бумажные индикаторные системы представляют собой полоски или диски хроматографической бумаги, пропитанные соответствующими субстратами и индикаторами и покрытые для стабилизации пленкообразующим полимером — водным раствором поливинилового спирта.

Сахаролитические ферменты расщепляющие углеводы Эти ферменты расщепляют углеводы до альдегидов, кислот, углекислого газа и H2. Для их определения используют МПБ или МПА, к которым добавляют индикатор кислотообразования + углевод + поплавок для газообразования. Пример - среды Гисса. Если свет среды меняется, выделяется газ, значит идет расщепление углеводов (моносахара). На этом принципе создаются панели, планшеты, бумажные индикаторные системы и приборы для учета ферментативной активности.

Среды Гисса

Липолитические ферменты – липазы – выявляют на ЖСА – желточно- солевой агар, который содержит желток, разрушение липидов желтка сопровождается помутнением среды

Комплексная система идентификации бактерий Микробиологический анализатор Multiskan FC Позволяет идентифицировать более 500 видов микроорганизмов и патогенных грибов. Система микробиологической диагностики включает оценку данных, полученных в результате проведения исследований по идентификации микроорганизмов и определении их антибиотикочувствительности in vitro, и коррекцию их на основании сведений о природной устойчивости или чувствительности отдельных микроорганизмов или их групп, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также сведений о корреляции данных по чувствительности, полученных in vitro, клинической эффективности антибактериальных препаратов.

Спасибо за внимание!