Презентация на тему: ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Лактатдегидрогеназа – относится к классу оксидоредуктаз. Лактатдегидрогеназа – относится к классу оксидоредуктаз. Оксидоредуктазы катализируют ОВР. ЛДГ – цитоплазматический цинксодержащий гликолитический фермент, обратимо катализирующий восстановление пировиноградной кислоты (пируват) в молочную кислоту(лактат) в процессе окисления глюкозы и образования молочной кислоты. ПИРУВАТ +НАД(Н) ЛАКТАТ +НАД

Фермент широко распространен в организме человека. По степени убывания активности фермента органы и ткани располагаются в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. Фермент широко распространен в организме человека. По степени убывания активности фермента органы и ткани располагаются в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови.

ЛДГ имеет 5 изоферментов, представляющих различные комбинации из четырех субъединиц двух основных типов – Н(сердце) и М(мышцы) по названию органов, где обнаружена их наибольшая активность, которые обозначают цифрами от 1 до5 : ЛДГ1,ЛДГ2,…..ЛДГ5. ЛДГ имеет 5 изоферментов, представляющих различные комбинации из четырех субъединиц двух основных типов – Н(сердце) и М(мышцы) по названию органов, где обнаружена их наибольшая активность, которые обозначают цифрами от 1 до5 : ЛДГ1,ЛДГ2,…..ЛДГ5.

В составе изофермента может быть 4 субъединицы типа Н(4Н) НННН; В составе изофермента может быть 4 субъединицы типа Н(4Н) НННН; В другом 3 субъединицы Н и одна М(3Н1М) НННМ В 3м – 2 субъединицы Н и 2 субъединицы М(2Н2М) ННММ; В 4м – 1 субъединица Н и 3 М(1Н3М) НМММ В 5М – четыре субъединицы М(4М) ММММ

В тканях с преимущественным аэробным обменом веществ (мозг, сердце, почки) наибольшей активностью обладают В тканях с преимущественным аэробным обменом веществ (мозг, сердце, почки) наибольшей активностью обладают ЛДГ1 и ЛДГ2; В тканях с выраженным анаэробным обменом веществ (печень, легкие, скелетная мускулатура, и др.) преобладают ЛДГ4 и ЛДГ5. Изофермент ЛДГ1 активен при низкой концентрации пирувата и ингибируется его избытком, ЛДГ5 активен при высоких концентрациях пирувата. ЛДГ1 происходит в основном из сердца, а ЛДГ5 – из печени.

ЛДГ1 обладает устойчивостью к действию мочевины. ЛДГ содержится не только в сыворотке , но и в эритроцитах, поэтому сыворотка для анализа должна быть свежей, без следов гемолиза. ЛДГ1 обладает устойчивостью к действию мочевины. ЛДГ содержится не только в сыворотке , но и в эритроцитах, поэтому сыворотка для анализа должна быть свежей, без следов гемолиза. Исследование общей активности фермента характеризует интенсивность ОВР организма, определение активности отдельных изоферментов ЛДГ способствует диагностике некоторых заболеваний сердца, печени и др. органов

Существуют следующие методы определения общей активности ЛДГ в сыворотке крови: Существуют следующие методы определения общей активности ЛДГ в сыворотке крови: Колориметрические : Динитрофенилгидразиновые методы основаны на определении количества ПВК (продукт реакции) при помощи 2,4-ДНФГ (унифицированный метод) Редоксиндикаторные методы основаны на превращении бесцветной окисленной формы тетрозолиевых солей в окрашеную форму за счет окисления восстановленного молочной кислотой НАДН.

Спектрофотометрические – основаный на различии спектров поглощения окисленной и восстановленной формой НАД. Спектрофотометрические – основаный на различии спектров поглощения окисленной и восстановленной формой НАД. Принцип метода: ЛДГ катализирует превращение лактата в пируват при одновременном восстановлении НАД в НАД(Н) , которые далее восстанавливает в присутствии п-метилфеназонийметилсульфата йоднитротетразониевой фиолетовый в красный формазан.

Одновременно с определением общей каталитической активности ЛДГ можно определить долю фермента, устойчивого к действию мочевины, что характерно для изофермента сердечной фракции. Одновременно с определением общей каталитической активности ЛДГ можно определить долю фермента, устойчивого к действию мочевины, что характерно для изофермента сердечной фракции. НАД(Н)+йоднитротетрафиолет+N- метил-Ф. красный формазан+НАД

В норме основным источником ЛДГ в сыворотке крови являются разрушенные клетки крови. При повреждении тканей фермент поступает в кровь. В норме основным источником ЛДГ в сыворотке крови являются разрушенные клетки крови. При повреждении тканей фермент поступает в кровь. Активность общей ЛДГ возрастает при повреждении миокарда, лейкозах, почечных заболеваниях, гемолитической, серповидноклеточной анемиях, тромбоцитопениях, инфекционных мононуклеозах, а также прогрессивной мышечной дистрофии.

Все заболевания, протекающие с некрозом тканей(инфаркт миокарда, некротические поражения почек, гепатиты, панкреатиты, опухоли)как правило, сопровождаются резким повышением активности ЛДГ в сыворотке крови. Все заболевания, протекающие с некрозом тканей(инфаркт миокарда, некротические поражения почек, гепатиты, панкреатиты, опухоли)как правило, сопровождаются резким повышением активности ЛДГ в сыворотке крови.

Увеличение активности ЛДГ1-ЛДГ2: Увеличение активности ЛДГ1-ЛДГ2: Инфаркт миокарда, анемия Острые поражения почечной ткани Опухолевые заболевания яичников Увеличение активности ЛДГ3-ЛДГ4: Массивные разрушения тромбоцитов и вовлечение в патологический процесс лимфатической системы. Увеличение активности ЛДГ5: - Повреждение скелетных мышц, воспалительные заболевания мышц, печени (гепатиты, цирроз), раковые опухоли.

Увеличение общей ЛДГ: Увеличение общей ЛДГ: Вирусный гепатит, шок, гипоксия, обширные опухолевые процессы, циррозы, обтурационная желтуха, заболевания почек, опорно-мышечного аппарата. Нормальные показатели ЛДГ в сыворотке крови: 0,65-2,60 мккат/л Доля устойчивого к действию мочевины фермента (сердечная фракция) – 60-80%

Вопросы Вопросы Тесты

К какому классу ферментов относится ЛДГ? К какому классу ферментов относится ЛДГ? В каких органах содержится фермент? Как различаются ферменты ЛДГ? Где преимущественно содержится ферментЛДГ1? Где преимущественно содержится ферментЛДГ5? Какая фракция стабильна к мочевине ? Какими субъединицами представлен фермент ЛДГ? Какими методами можно определить активность ЛДГ? Почему при проведении анализа надо использовать свежую сыворотку?

№ мышечной фракции ЛДГ № мышечной фракции ЛДГ 33 – 75 30 – 50 52 – 83 42 – 80 На сколько % снижается активность ЛДГ через сутки? 5% 20% 10% 2% При какой температуре можно хранить исследуемую пробу? Комнатной 37 -10 0 Какими субъединицами представлен фермент ЛДГ? М Н В Какие методы более унифицированы? Спектрофотометрические Колориметрические